Plante-genomisk DNA-ekstraktionssæt

 

Produktnavn	Kat.nr.	Spec.
Plante-genomisk DNA-ekstraktionssæt	G3634-50T	50T

 

 

Gennem brugen af ​​centrifugal adsorptionssøjleteknologi og unikke buffersystem kan sættet ekstrahere genomisk DNA fra mange slags simple plantevæv sikkert, hurtigt og effektivt. Efter fuldstændig formaling med flydende nitrogen blev planteprøverne fuldt blandet med lysatet, som hurtigt kunne frigive genomisk DNA, og ekstraktionsoperationen blev kun afsluttet inden for 1 time. Sættet kan ekstrahere og oprense 1~10 ug genomisk DNA fra 50~100 mg plantevæv. Det ekstraherede genomiske DNA kan anvendes i PCR-amplifikation, restriktionsendonukleasefordøjelse, Southern-hybridisering, RAPD, AFLP, RFLP og andre konventionelle molekylærbiologiske eksperimenter.

 

 

RNase A afsendt med våd is og opbevaret ved -20 grad . Andre reagenser blev sendt og opbevaret ved stuetemperatur; gyldig i op til 12 måneder.

 

 

Komponentnummer	Komponent	G3634-50T
G3634-1	Buffer PGL1	25 ml
G3634-2	Buffer PGL2	7 ml
G3634-3	Buffer PD	9 ml
G3634-4	Buffer PW	24 ml
G3634-5	RNase A	350 μL
G3634-6	DNA-spinkolonner	50个
G3634-7	Opsamlingsrør	50个
G3634-8	Buffer TE	15 ml
Manuel		Ét eksemplar

 

 

1. De kryokonserverede planteprøver bør undgå gentagen frysning og optøning, ellers vil kvaliteten og udbyttet af ekstraheret DNA blive reduceret.

2. Hvis buffer PGL1 udfælder, skal du opvarme den til 65 grader før brug, indtil nedbøren forsvinder, bland godt og brug den.

3. Tilsæt venligst vandfri ethanol (se flasken) til Buffer PD og Buffer PW før brug.

 

 

1. Lysis af plantevæv:

en. Overfør hurtigt 50~100 mg frisk eller kryokonserveret plantevæv til et 2,0 mL RNase-frit malerør indeholdende 2~3 3 mm perler (anbefalet G0203-150G) og forkølet med flydende nitrogen (anbefalet HT-200-M). Placer malerøret på kværnen (anbefalet KZ-5F-3D) (afkøl hurtigt adapteren i flydende nitrogen før brug), indtil den er pulveriseret (hvis den ikke er fuldstændig formalet til pulver, det vil påvirke udbyttet og kvaliteten af ​​DNA). Tilsæt derefter 400 μL buffer PGL1 og 6 μL RNase A til malerøret, brug en pipette til at blæse, indtil der ikke er nogen tydelig udfældning i lysatet, stå ved stuetemperatur i 10 min.

b. Overfør hurtigt 50~100 mg frisk eller kryokonserveret plantevæv til et 1,5 mL RNase-frit centrifugerør. Tilsæt flydende nitrogen og kværn vævet med en støder, tilsæt flydende nitrogen kontinuerligt, indtil prøven er formalet til pulver (hvis den ikke er fuldstændig formalet til pulver, vil det påvirke udbyttet og kvaliteten af ​​DNA). Tilsæt derefter 400 μL buffer PGL1 og 6 μL RNase A til centrifugerøret, brug en væskepipette til at blæse, indtil der ikke er nogen tydelig udfældning i lysatet, og lad det stå ved stuetemperatur i 10 min.

c. Overfør hurtigt 50~100 mg frisk eller kryokonserveret plantevæv til en morter, der er forkølet med flydende nitrogen. Tilsæt flydende nitrogen og mal vævet med en støder, tilsæt flydende nitrogen kontinuerligt, indtil det er malet til pulver (hvis det ikke er fuldstændigt formalet til pulver, vil det påvirke udbyttet og kvaliteten af ​​DNA). Den pulveriserede prøve blev tilsat til et 1,5 mL RNase-frit centrifugerør indeholdende 400 μL buffer PGL1 og 6 μL RNase A, brug en pipette til at blæse, indtil der ikke er nogen tydelig udfældning i lysatet, og stå ved stuetemperatur i 10 minutter.

2. Tilsæt 130 μL buffer PGL2 til centrifugerøret, bland godt med apipette, og anbring det på isen i 5 min.

3. Centrifuger ved 12,000 rpm i 5 minutter, overfør supernatanten til et nyt centrifugerør.

4. Tilføj buffer PD med samme volumen som supernatanten til centrifugerøret og bland det på hovedet.

5. Placer DNA Spin Column på opsamlingsrøret, og overfør blandingen til DNA Spin Column. Hver tilsætning overstiger ikke 600 μL, hvis den overskrides, kan den tilsættes i batches.

6. Centrifuger 12,000 rpm i 30 s og kasser filtratet. Sæt DNA Spin Column tilbage i opsamlingsrøret.

7. Tilføj 600 μL buffer PW til DNA Spin Column (tilsæt venligst buffer PW langs rørvæggen for at hjælpe med at skylle restsaltet på rørvæggen), og centrifuger ved 12,000 rpm i 30 s, og kasser derefter filtratet .

8. Gentag trin 7.

9. Sæt DNA Spin Column i opsamlingsrøret, centrifuger ved 12, 000 rpm i 2 min.

10. Overfør Spin Column til et nyt Nuclease-frit 1,5 mL centrifugerør. stå ved stuetemperatur i 3 ~ 5 minutter, så den resterende ethanol fra Spin Column kan fordampes fuldstændigt.

11. Tilføj 50~100 μL buffer TE eller nukleasefrit vand til centrifugerøret, lad det stå ved stuetemperatur i 5 minutter (opvarmning af buffer TE eller nukleasefrit vand til 65 grader er en fordel for at forbedre elueringseffektiviteten).

12. Centrifuger ved 12,000 rpm i 2 minutter for at opsamle DNA. For at få en højere koncentration af DNA kan du også tilføje den første eluent tilbage til DNA Spin Column, derefter stå ved stuetemperatur i 5 minutter og centrifugere i 2 minutter for at indsamle DNA igen.

 

 

1. Prøv at bruge frisk plantevæv for at sikre udbyttet og integriteten af ​​genomisk DNA.

2. Til langtidskonservering bør det ekstraherede DNA elueres med Buffer TE og opbevares ved -80 grad.

3. Det opnåede genomiske DNA bør undgå gentagen frysning og optøning.

 

 

Det genomiske DNA-udbytte ekstraheret fra en række planteprøver med dette kit er vist i tabellen nedenfor. Genomisk DNA-udbytte er relateret til plantearter, organer og vækststatus. Den anbefalede dosering af prøver er vist i tabellen nedenfor.

Prøve	Dosering	DNA udbytte
Oryza sativaL blad	50 mg	5~10 ug
Brassica napusL blad	50 mg	4~8 ug
Arabidopsis thaliana blad	80 mg	{0}.5~1 ug
Nicotiana tabacum blad	50 mg	2~4 ug
Lycopersicon esculentum blad	50 mg	2~5 ug
Allium tuberosum Rottler ex Sprengle blad	50 mg	3~6 ug
ApiumgraveolensL blad	50 mg	2~4 ug
Epipremnum aureum blad	50 mg	{0}.5~1 ug
Populus alba blad	50 mg	1~2 ug
Brassica rapa var. glabra Regel blad	50 mg	1~2 ug

 

Kun til forskningsbrug!

 

 

Populære tags: plante genomisk dna ekstraktionssæt, Kina plante genomisk dna ekstraktionssæt fabrikanter, leverandører, fabrik