® IF555-Hvedekim-agglutinin (WGA, rødt lys)

 

Produktnavn	Kat. Ingen.	Spec.
iF555-Hvedekim-agglutinin (WGA, rødt lys)	G1731	100UL

 

 

Hvedekim agglutinin (WGA) er et lectin, der binder sig til N-acetyl-D-glucosamin og sialinsyre, og er en af ​​de mest undersøgte og udbredte klasser af lectiner. Det er i øjeblikket den mest undersøgte og udbredte klasse af lektiner. WGA binder til glycokonjugater, og dets derivater og konjugater bruges i vid udstrækning til mærkning af cellemembraner og fibrotisk arvæv til fluorescensbilleddannelse og -analyse. Den kulhydratbindende specificitet af WGA er rettet mod en sekvens af -1,4-GlcNAc-forbundne rester, kendt som kitin dextriner. Hvert monosaccharid indeholder to identiske, ikke-interagerende bindingssteder, der er komplementære til tre eller fire -1,4-GlcNAc-enheder. Af de testede monosaccharider binder kun GlcNAc til WGA, ManNAc binder ikke, og GalNAc binder kun svagt. WGA binder med høj affinitet til interne GlcNAc-rester i store oligosaccharider indeholdende Gal (1-4)GlcNAc (1-3) (dvs. poly(aminolactose)-type glycaner) gentagelser.N-acetylneuraminsyre deltager kun i WGA-interaktionen med lav affinitet. WGA viser et komplekst mønster af glycanspecificitet, der kan bruges til strukturel analyse af komplekse kulhydrater. iFluor®555-affikset af WGA er sandsynligvis det klareste WGA-affiks. Det udviser den klare og røde fluorescens af iFluor®555 farvestoffet. iFluor®555 WGA-affix binder til sialinsyre- og N-acetylglucosaminylrester ligesom AF555 WGA-kobleren.

 

Wheat Germ Agglutinin (WGA) er et 36 kDa lektin, der almindeligvis anvendes til at mærke pattedyrsceller, cellemembraner af gram-positive bakterier og gær, såvel som skelet- og hjerte-sakrale membraner, blandt andet på grund af dets egenskab til at koble til N-acetyl - -D-glucosaminylrester og N-acetyl- -D-glucosaminyl-oligomerer i cellemembraner. Når WGA bruges til kardiomyocytfarvning, kan kardiomyocytternes cellemembraner farves ud, så om de er hypertrofe eller ej kan ses ved sammenligning af billedet med normalgruppen, og diameteren og arealet af de farvede celler kan også måles med specialiseret software, der muliggør analyse af, om kardiomyocytterne er hypertrofe eller ej.

 

 

Skib med våd is; Opbevares ved -20 grad i 12 måneder.

 

 

Komponent	G1722-50UL
iF555-Hvedekim-agglutinin (WGA, rødt lys)	100 μL
Manuel	1 stk

 

 

1. Forbered din egen1×PBS buffer(pH 7.2-7.4, anbefalesG4202), fikseringsmiddel indeholdende 3.0-4.0% formaldehyd (anbefalesG1101, indeholdende 4% PFA),anti-fluorescens quenching sealer(anbefales G1401), ogDAPI-farvningsløsning, der er klar til brug(anbefalesG1012).

2. Når du bruger produktet for første gang, centrifuger det fuldt smeltede produkt ved lav hastighed i 1 min. for at forhindre tab af væskerørsvæg. Det anbefales at dispensere produktet i henhold til den mængde, der er brugt i et enkelt eksperiment for at forhindre tab af opløsningsmiddel ved fordampning. Opbevares ved -20 grader væk fra lys.

3. Før formelle eksperimenter, aspirer 5 μL iF555-hvedekim-agglutinin (WGA, rødt lys) og bland med 1 mL PBS for at fåhvis555-WGA arbejdsløsning. Farvningseffekten kan være forskellig for forskellige celletyper. Se venligst litteraturen for den optimale farvningsarbejdskoncentration eller udfør en forhåndstest for at finde ud af det.hvis555-WGA arbejdsløsninger klar til brug, opbevares ved stuetemperatur og beskyttet mod lys og bruges samme dag.

 

 

Farvning af levende celler (12-brøndplade som eksempel)

1. Vask cellerne med 1×PBS buffer i 2 gange.

2. Tilsæt 100 μL iF555-WGA-arbejdsopløsning til hver cellebrønd, og inkuber i 10-30 minutter ved 37 grader, beskyttet mod lys. Pas på forseglingen for at forhindre væskefordampning. Fjern inkubationsopløsningen og vask med bufferopløsning 2-3 gange i 3-5 min hver gang.

3. Efter at inkubationen var afsluttet, blev cellerne vasket tre gange med 1 x PBS buffer i 5 minutter hver gang.

4. Resultater blev observeret ved fluorescensmikroskopi eller konfokal lasermikroskopi.

 

Fast cellefarvning (6-brøndpladecelle-crawler som et eksempel)

1. Dyrkede celler blev kravlet (ved en densitet på mindst 50 % konfluens), dyrkningsmediet blev fjernet, og cellerne blev vasket to gange med 1 x PBS-buffer forvarmet ved 37 grader.

2. Tilsæt passende mængde fikseringsmiddel for at dække cellerne og fikser i 10-30 min ved stuetemperatur.

3. Fikseringsmidlet blev aspireret, og cellerne blev vasket med 1 x PBS-buffer ved stuetemperatur 2-3 gange i 10 minutter hver.

4. Efter at cellecrawleren er blevet rystet let tør, tegnes en cirkel med en histokemisk pen, så cellerne var placeret i midten af ​​cirklen. Tag 100 μL iF555-WGA-arbejdsopløsning for at dække cellerne fuldstændigt, og inkuber ved 37 grader i 30 minutter væk fra lys. Vær omhyggelig med at forsegle og forhindre væsken i at fordampe for at tørre objektglassene.

5. Efter at inkubationen var afsluttet, blev cellerne vasket tre gange med 1 x PBS-buffer i 5 minutter hver gang.

6. (Valgfrit) Dråber klar-til-brug DAPI-farvningsopløsning blev tilsat til crawler-objektglassene for at dække cellerne, og nuklear farvning blev udført i 8 min. Cellerne blev vasket med 1× PBS-buffer 2-3 gange for 30 s-1 min hver gang.

7. Cellegennemgange blev rystet let tørre og vendt på et objektglas med en dråbe anti-fluorescens quenching sealer, og overskydende sealer blev fjernet med et papirhåndklæde.

[Note]Trin 6 og 7, kan erstattes med DAPI-holdig anti-fluorescens quenching sealer (anbefaling G1407), som udfører farvning af kernerne og forsegling af filmen på samme tid.

8. Resultaterne blev observeret ved fluorescensmikroskopi eller laser konfokal mikroskopi med 555 (Ex/Em=556/574 nm) og DAPI (Ex/Em=364/454 nm) kanaler valgt.

 

Farvning af vævssnit

1. Forbehandling af vævssektionering:

Frosne sektioner (friske vævsfrosne sektioner eller fikserede vævsfrosne sektioner) blev efterladt ved stuetemperatur i adskillige minutter og vendt tilbage til stuetemperatur; sektioner blev nedsænket i fiksativ i 10-15 minutter ved stuetemperatur, fjernet og tørret naturligt og derefter fugtet og vasket i renset vand eller 1×PBS-buffer for at fjerne det resterende fikseringsmiddel på vævet.

Paraffinsektioner blev afvokset og rehydreret;

Vævssektioner (paraffinsnit eller frosne sektioner af fikserede væv) blev anbragt i en reparationskassette fyldt med EDTA-antigenreparationsbuffer (pH 8.0) i en mikrobølgeovn til antigenreparation. Medium varme i 8 minutter ildstop i 8 minutter til middel-lav varme i 7 minutter, denne proces bør forhindre overdreven fordampning af buffer, tørre ikke objektglassene. Efter naturlig afkøling blev objektglassene anbragt i 1 x PBS-buffer og vasket ved omrystning på en affarvningsryster i 3 gange, hver gang i 5 min.

2. Farvning: Tegn en cirkel rundt om vævet med en histokemisk pen, efter at vævssektionen er let tørret. Tilføj 50-100 μL iF555-WGA-arbejdsopløsning til cirklen for at dække vævet, og inkuber ved 37 grader væk fra lyset i 30 min. Sørg for tætning for at forhindre væsken i at fordampe og tørre objektglassene.

3. Vask: Efter at inkubationen var afsluttet, blev prøverne vasket tre gange med 1 x PBS-buffer i 5 minutter hver gang.

4. Nucleus-farvning (valgfrit): tilsæt dråbevis DAPI-farvningsklar opløsning til prøven for at dække cellerne, og udfør nucleus-farvning i 8 min. Vask prøven med 1×PBS-buffer 2-3 gange i 30 s-1 min hver gang.

5. Forsegling: Efter at sektionerne er rystet let tørre, tilsættes en dråbe Anti-fluorescens quenching sealer til prøven og forsegle den med et passende dækglas.

[Note]Trin 4 og 5, kan erstattes med DAPI-holdig anti-fluorescens quenching sealer (anbefaling G1407), som udfører farvning af kernen og forsegling af filmen på samme tid.

6. Mikroskopi: Fluorescensmikroskopi eller laserkonfokalmikroskopi for at observere resultaterne ved at vælge kanalerne 488 (Ex/Em=556/574 nm) og DAPI (Ex/Em=364/454 nm).

 

 

1. Prøver, der har været fikseret i lang tid (f.eks. paraffinsnit) skal underkastes en pyrolysereparationsproces, ellers vil de positive resultater være svage eller tæt på ingen.

2. WGA-farvning til myokardieanalyse kræver et højt niveau af myokardievæv, som skal være fuldstændigt og homogent, og det er bedst at give prøver af paraffinsnit.

3. For cellulære prøver skal du undgå brugen af ​​permeabiliserende opløsninger før farvning, da dette kan forårsage farvning af cytoplasmatiske strukturelle komponenter.

4. Fluorescerende farvestoffer er genstand for quenching, og det anbefales, at test- og observationsfotos færdiggøres så hurtigt som muligt efter farvning.

5. Bær venligst laboratoriefrakke og handsker under drift.

 

Kun til forskningsbrug!

 

 

Populære tags: ® if555-hvedekim-agglutinin (wga, rødt lys), Kina ® if555-hvedekim-agglutinin (wga, red light) producenter, leverandører, fabrik