Lysebuffer for røde blodlegemer

Red Blood Cell Lysis Buffer (ACK Lysis Buffer) er en klassisk lyseringsopløsning designet til at fjerne røde blodlegemer uden at beskadige kerneholdige celler. Erytrocytlysatet lyserer vævsceller, der ikke indeholder erytrocytter, og kan yderligere bruges til primær kultur, cellefusion, flowcytometrisk analyse, separation og ekstraktion af nukleinsyrer og proteiner. Det grundlæggende princip er at lysere erytrocytter ved at bruge forskellen i intracellulær osmolaritet til at få cellemembranen til at svulme. Hovedkomponenterne omfatter ammoniumchlorid, kaliumbicarbonat og EDTA-Na2. Ammoniumioner kan ikke passere gennem cellemembranen, mens andre ioner kan, hvilket resulterer i forskellen i ionkoncentration mellem indersiden og ydersiden af ​​cellen, og diffusion af eksternt vand ind i cellen, hvilket får de røde blodlegemer til at svulme og opnå lysis effekt. Produktet filtreres og steriliseres med 0.2 μm filtermembran.

Skib med våd is; Opbevares ved 2-8 grad , gyldig i 12 måneder.

Vævs-/celleprøver:

1. Frisk væv fordøjes af trypsin eller collagenase og dispergeres i individuel cellesuspension. Centrifuger ved 300-400 g i 5 minutter ved 4 grader og kassér supernatanten.

2. Tilsæt lyseringsbuffer for røde blodlegemer til celleudfældningen i et forhold på 1:3-5, bland med forsigtigt blæsning og lysér i 1-2 min.

3. Centrifuger ved 800-1000 rpm i 5-8 min ved 4 grader, og kassér derefter den røde supernatant. Gentag trin 2 og 3, hvis lyseringen er ufuldstændig.

4. Cellerne blev resuspenderet ved at tilsætte 3-5 ml Hanks opløsning eller serumfrit dyrkningsmedium til den præcipiterede fraktion og derefter centrifugeret ved 300-400 g i 3-5 min ved 4 grader. Dette trin blev gentaget 2-3 gange for at vaske cellerne.

5. Resuspenderede celler med passende opløsning efter behov til efterfølgende eksperimenter; Til RNA-ekstraktion foretrækkes det at bruge opløsningen fremstillet med DEPC-vand i begyndelsen af ​​trin 4.

1. Frisk antikoagulantblod, kasser supernatanten efter centrifugering.

2. Foreslå mængden af ​​celleudfældning og tilsæt 2-8 graders forafkølet lyseringsbuffer for røde blodlegemer til celleudfældningen i et forhold på 1:6-10. For eksempel, for 0.2 mL celleudfældning, tilsæt 1.2-2.0 mL lyseringsbuffer for røde blodlegemer, blæs forsigtigt for at blande og lysér i {{11} } min ved 4 grader eller stuetemperatur.

3. Centrifuger ved 800-1000 rpm i 5-8 min ved 4 grader, og kassér derefter den røde supernatant. Hvis erytrocytlyset er ufuldstændigt, gentag trin 2 og 3 én gang;

4. Cellerne blev resuspenderet ved at tilsætte Hanks opløsning eller serumfrit dyrkningsmedium til den præcipiterede fraktion og derefter centrifugeret ved 300-400 g i 3-5 min ved 4 grader. Dette trin blev gentaget 2-3 gange for at vaske cellerne;

5. Resuspenderede celler med passende opløsning efter behov til efterfølgende eksperimenter; Til RNA-ekstraktion foretrækkes det at bruge opløsningen fremstillet med DEPC-vand i begyndelsen af ​​trin 4.

1. Dette produkt er blevet filtreret og steriliseret. Vær opmærksom på aseptisk drift for at undgå kontaminering.

2. Hvis opfølgningstesten anvendes til cellekultur, skal operationen udføres på en ultra-ren bænk med opmærksomhed på aseptisk operation for at undgå kontaminering af cellerne og påvirkning af cellekulturen.

3. Hvis der efter centrifugalvask findes en meget lille mængde erytrocytter, kan testen fortsættes uden at påvirke den efterfølgende påvisning.

4. For din sikkerhed og sundhed skal du bære sikkerhedsbriller, handsker eller beskyttelsestøj.

Kun til forskningsbrug!

Populære tags: røde blodlegemer lysis buffer, Kina røde blodlegeme lysis buffer fabrikanter, leverandører, fabrik